Terima kasih telah mengunjungi nature.com. Versi peramban yang Anda gunakan memiliki dukungan CSS yang terbatas. Untuk pengalaman terbaik, kami sarankan menggunakan versi peramban terbaru (atau menonaktifkan mode kompatibilitas di Internet Explorer). Selain itu, untuk memastikan dukungan berkelanjutan, situs ini tidak akan menyertakan gaya atau JavaScript.
Melamin merupakan kontaminan makanan yang dikenal dan dapat ditemukan dalam kategori makanan tertentu, baik secara tidak sengaja maupun sengaja. Tujuan penelitian ini adalah untuk memverifikasi deteksi dan kuantifikasi melamin dalam susu formula bayi dan susu bubuk. Sebanyak 40 sampel makanan yang tersedia secara komersial, termasuk susu formula bayi dan susu bubuk, dari berbagai wilayah di Iran dianalisis. Kandungan melamin dalam sampel ditentukan menggunakan sistem kromatografi cair kinerja tinggi-ultraviolet (HPLC-UV). Kurva kalibrasi (R2 = 0,9925) dibuat untuk deteksi melamin dalam kisaran 0,1–1,2 μg mL−1. Batas kuantifikasi dan deteksi masing-masing adalah 1 μg mL−1 dan 3 μg mL−1. Melamin diuji dalam susu formula bayi dan susu bubuk, dan hasilnya menunjukkan bahwa kadar melamin dalam sampel susu formula bayi dan susu bubuk masing-masing adalah 0,001–0,095 mg kg−1 dan 0,001–0,004 mg kg−1. Nilai-nilai ini sesuai dengan peraturan Uni Eropa dan Codex Alimentarius. Penting untuk dicatat bahwa konsumsi produk susu dengan kandungan melamin yang dikurangi ini tidak menimbulkan risiko signifikan bagi kesehatan konsumen. Hal ini juga didukung oleh hasil penilaian risiko.
Melamin adalah senyawa organik dengan rumus molekul C3H6N6, yang berasal dari sianamida. Senyawa ini memiliki kelarutan yang sangat rendah dalam air dan mengandung sekitar 66% nitrogen. Melamin merupakan senyawa industri yang banyak digunakan dengan berbagai kegunaan yang sah dalam produksi plastik, pupuk, dan peralatan pengolahan makanan (termasuk kemasan makanan dan peralatan dapur)1,2. Melamin juga digunakan sebagai pembawa obat untuk pengobatan penyakit. Proporsi nitrogen yang tinggi dalam melamin dapat menyebabkan penyalahgunaan senyawa ini dan memberikan sifat molekul protein pada bahan makanan3,4. Oleh karena itu, penambahan melamin ke produk makanan, termasuk produk susu, meningkatkan kandungan nitrogen. Dengan demikian, disimpulkan secara keliru bahwa kandungan protein susu lebih tinggi dari yang sebenarnya.
Untuk setiap gram melamin yang ditambahkan, kandungan protein makanan akan meningkat sebesar 0,4%. Namun, melamin sangat larut dalam air dan dapat menyebabkan bahaya yang lebih serius. Menambahkan 1,3 gram melamin ke produk cair seperti susu dapat meningkatkan kandungan protein susu hingga 30%5,6. Meskipun melamin ditambahkan ke makanan hewani dan bahkan makanan manusia untuk meningkatkan kandungan protein7, Komisi Codex Alimentarius (CAC) dan otoritas nasional belum menyetujui melamin sebagai aditif makanan dan telah mencantumkannya sebagai zat berbahaya jika tertelan, terhirup, atau diserap melalui kulit. Pada tahun 2012, Badan Internasional untuk Penelitian Kanker (IARC) dari Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) mencantumkan melamin sebagai karsinogen Kelas 2B karena dapat membahayakan kesehatan manusia8. Paparan melamin jangka panjang dapat menyebabkan kanker atau kerusakan ginjal2. Melamin dalam makanan dapat berikatan kompleks dengan asam sianurat membentuk kristal kuning yang tidak larut dalam air yang dapat menyebabkan kerusakan pada jaringan ginjal dan kandung kemih, serta kanker saluran kemih dan penurunan berat badan9,10. Melamin dapat menyebabkan keracunan makanan akut dan, dalam konsentrasi tinggi, kematian, terutama pada bayi dan anak kecil.11 Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) juga telah menetapkan asupan harian yang dapat ditoleransi (TDI) melamin untuk manusia sebesar 0,2 mg/kg berat badan per hari berdasarkan pedoman CAC.12 Badan Pengawas Obat dan Makanan AS (US FDA) telah menetapkan tingkat residu maksimum untuk melamin sebesar 1 mg/kg dalam susu formula bayi dan 2,5 mg/kg dalam makanan lainnya.2,7 Pada bulan September 2008, dilaporkan bahwa beberapa produsen susu formula bayi domestik telah menambahkan melamin ke dalam susu bubuk untuk meningkatkan kandungan protein produk mereka, yang mengakibatkan keracunan susu bubuk dan memicu insiden keracunan melamin nasional yang menyebabkan lebih dari 294.000 anak sakit dan lebih dari 50.000 dirawat di rumah sakit. 13
Menyusui tidak selalu memungkinkan karena berbagai faktor seperti kesulitan kehidupan perkotaan, penyakit ibu atau anak, yang menyebabkan penggunaan susu formula untuk memberi makan bayi. Akibatnya, pabrik-pabrik telah didirikan untuk memproduksi susu formula yang komposisinya sedekat mungkin dengan ASI14. Susu formula yang dijual di pasaran biasanya terbuat dari susu sapi dan biasanya dibuat dengan campuran khusus lemak, protein, karbohidrat, vitamin, mineral, dan senyawa lainnya. Agar mendekati ASI, kandungan protein dan lemak dalam susu formula bervariasi, dan tergantung pada jenis susu, susu tersebut diperkaya dengan senyawa seperti vitamin dan mineral seperti zat besi15. Karena bayi merupakan kelompok yang sensitif dan terdapat risiko keracunan, keamanan konsumsi susu formula sangat penting bagi kesehatan. Setelah kasus keracunan melamin pada bayi di Tiongkok, negara-negara di seluruh dunia telah memberikan perhatian khusus pada masalah ini, dan sensitivitas di bidang ini juga meningkat. Oleh karena itu, sangat penting untuk memperkuat pengawasan produksi susu formula untuk melindungi kesehatan bayi. Terdapat berbagai metode untuk mendeteksi melamin dalam makanan, termasuk kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC), elektroforesis, metode sensorik, spektrofotometri, dan uji imunosorben terkait enzim antigen-antibodi16. Pada tahun 2007, Badan Pengawas Obat dan Makanan AS (FDA) mengembangkan dan menerbitkan metode HPLC untuk penentuan melamin dan asam sianurat dalam makanan, yang merupakan metode paling efektif untuk menentukan kandungan melamin17.
Konsentrasi melamin dalam susu formula bayi yang diukur menggunakan teknik spektroskopi inframerah baru berkisar antara 0,33 hingga 0,96 miligram per kilogram (mg kg-1). 18 Sebuah studi di Sri Lanka menemukan kadar melamin dalam susu bubuk berkisar antara 0,39 hingga 0,84 mg kg-1. Selain itu, sampel susu formula bayi impor mengandung kadar melamin tertinggi, yaitu masing-masing 0,96 dan 0,94 mg/kg. Kadar ini berada di bawah batas peraturan (1 mg/kg), tetapi program pemantauan diperlukan untuk keselamatan konsumen. 19
Beberapa penelitian telah mengkaji kadar melamin dalam susu formula bayi Iran. Sekitar 65% sampel mengandung melamin, dengan rata-rata 0,73 mg/kg dan maksimum 3,63 mg/kg. Penelitian lain melaporkan bahwa kadar melamin dalam susu formula bayi berkisar antara 0,35 hingga 3,40 μg/kg, dengan rata-rata 1,38 μg/kg. Secara keseluruhan, keberadaan dan kadar melamin dalam susu formula bayi Iran telah dinilai dalam berbagai penelitian, dengan beberapa sampel mengandung melamin yang melebihi batas maksimum yang ditetapkan oleh otoritas pengatur (2,5 mg/kg/pemberian).
Mengingat besarnya konsumsi langsung dan tidak langsung susu bubuk dalam industri makanan dan pentingnya susu formula bayi dalam pemberian makan anak, penelitian ini bertujuan untuk memvalidasi metode deteksi melamin dalam susu bubuk dan susu formula bayi. Pada kenyataannya, tujuan pertama penelitian ini adalah untuk mengembangkan metode kuantitatif yang cepat, sederhana, dan akurat untuk mendeteksi pemalsuan melamin dalam susu formula bayi dan susu bubuk menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dan deteksi ultraviolet (UV); Kedua, tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan kandungan melamin dalam susu formula bayi dan susu bubuk yang dijual di pasar Iran.
Instrumen yang digunakan untuk analisis melamin bervariasi tergantung pada lokasi produksi makanan. Metode analisis HPLC-UV yang sensitif dan andal digunakan untuk mengukur residu melamin dalam susu dan susu formula bayi. Produk susu mengandung berbagai protein dan lemak yang dapat mengganggu pengukuran melamin. Oleh karena itu, seperti yang dicatat oleh Sun dkk. 22, strategi pembersihan yang tepat dan efektif diperlukan sebelum analisis instrumental. Dalam penelitian ini, kami menggunakan filter jarum suntik sekali pakai. Dalam penelitian ini, kami menggunakan kolom C18 untuk memisahkan melamin dalam susu formula bayi dan susu bubuk. Gambar 1 menunjukkan kromatogram untuk deteksi melamin. Selain itu, perolehan kembali sampel yang mengandung 0,1–1,2 mg/kg melamin berkisar antara 95% hingga 109%, persamaan regresi adalah y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), dan nilai deviasi standar relatif (RSD) berkisar antara 0,8 hingga 2%. Data yang tersedia menunjukkan bahwa metode ini dapat diandalkan dalam rentang konsentrasi yang dipelajari (Tabel 1). Batas deteksi instrumental (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ) melamin masing-masing adalah 1 μg mL−1 dan 3 μg mL−1. Selain itu, spektrum UV melamin menunjukkan pita serapan pada 242 nm. Metode deteksi ini sensitif, andal, dan akurat. Metode ini dapat digunakan untuk penentuan rutin kadar melamin.
Hasil serupa telah dipublikasikan oleh beberapa penulis. Metode kromatografi cair kinerja tinggi-susunan fotodioda (HPLC) dikembangkan untuk analisis melamin dalam produk susu. Batas bawah kuantifikasi adalah 340 μg kg−1 untuk susu bubuk dan 280 μg kg−1 untuk susu formula bayi pada 240 nm. Filazzi dkk. (2012) melaporkan bahwa melamin tidak terdeteksi dalam susu formula bayi dengan HPLC. Namun, 8% sampel susu bubuk mengandung melamin pada kadar 0,505–0,86 mg/kg. Tittlemiet dkk.23 melakukan studi serupa dan menentukan kandungan melamin dalam susu formula bayi (jumlah sampel: 72) dengan kromatografi cair kinerja tinggi-spektrometri massa/MS (HPLC-MS/MS) sekitar 0,0431–0,346 mg kg−1. Dalam sebuah studi yang dilakukan oleh Venkatasamy dkk. (2010), pendekatan kimia hijau (tanpa asetonitril) dan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik (RP-HPLC) digunakan untuk memperkirakan melamin dalam susu formula bayi dan susu. Rentang konsentrasi sampel adalah dari 1,0 hingga 80 g/mL dan responsnya linier (r > 0,999). Metode ini menunjukkan perolehan kembali sebesar 97,2–101,2 pada rentang konsentrasi 5–40 g/mL dan reprodusibilitasnya kurang dari 1,0% deviasi standar relatif. Selanjutnya, LOD dan LOQ yang diamati masing-masing adalah 0,1 g mL−1 dan 0,2 g mL−124. Lutter dkk. (2011) menentukan kontaminasi melamin dalam susu sapi dan susu formula bayi berbasis susu menggunakan HPLC-UV. Konsentrasi melamin berkisar dari < 0,2 hingga 2,52 mg kg−1. Rentang dinamis linier metode HPLC-UV adalah 0,05 hingga 2,5 mg kg−1 untuk susu sapi, 0,13 hingga 6,25 mg kg−1 untuk susu formula bayi dengan fraksi massa protein <15%, dan 0,25 hingga 12,5 mg kg−1 untuk susu formula bayi dengan fraksi massa protein 15%. Hasil LOD (dan LOQ) adalah 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) untuk susu sapi, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) untuk susu formula bayi <15% protein, dan 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) untuk susu formula bayi 15% protein, dengan rasio sinyal terhadap derau masing-masing 3 dan 1025 untuk LOD dan LOQ. Diebes dkk. (2012) meneliti kadar melamin dalam sampel susu formula bayi dan susu bubuk menggunakan HPLC/DMD. Dalam susu formula bayi, kadar terendah dan tertinggi masing-masing adalah 9,49 mg kg−1 dan 258 mg kg−1. Batas deteksi (LOD) adalah 0,05 mg kg−1.
Javaid dkk. melaporkan bahwa residu melamin dalam susu formula bayi berada dalam kisaran 0,002–2 mg kg−1 dengan spektroskopi inframerah transformasi Fourier (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai dkk.27 mengusulkan metode HPLC-DDA (λ = 220 nm) untuk memperkirakan melamin dan mencapai LOQ sebesar 0,08 μg mL−1 untuk susu bubuk, yang lebih rendah daripada tingkat yang diperoleh dalam penelitian ini. Sun dkk. mengembangkan RP-HPLC-DAD untuk deteksi melamin dalam susu cair dengan ekstraksi fase padat (SPE). Mereka memperoleh LOD dan LOQ masing-masing sebesar 18 dan 60 μg kg−128, yang lebih sensitif daripada penelitian saat ini. Montesano dkk. mengkonfirmasi keefektifan metode HPLC-DMD untuk penilaian kandungan melamin dalam suplemen protein dengan batas kuantifikasi 0,05–3 mg/kg, yang kurang sensitif dibandingkan metode yang digunakan dalam penelitian ini29.
Tidak diragukan lagi, laboratorium analitik memainkan peran penting dalam melindungi lingkungan dengan memantau polutan dalam berbagai sampel. Namun, penggunaan sejumlah besar reagen dan pelarut selama analisis dapat mengakibatkan pembentukan residu berbahaya. Oleh karena itu, kimia analitik hijau (GAC) dikembangkan pada tahun 2000 untuk mengurangi atau menghilangkan dampak buruk prosedur analitik terhadap operator dan lingkungan26. Metode deteksi melamin tradisional termasuk kromatografi, elektroforesis, elektroforesis kapiler, dan uji imunosorben terkait enzim (ELISA) telah digunakan untuk mengidentifikasi melamin. Namun, di antara banyak metode deteksi, sensor elektrokimia telah menarik banyak perhatian karena sensitivitas, selektivitas, waktu analisis yang cepat, dan karakteristik ramah pengguna yang sangat baik30,31. Nanoteknologi hijau memanfaatkan jalur biologis untuk mensintesis nanomaterial, yang dapat mengurangi produksi limbah berbahaya dan konsumsi energi, sehingga mendorong penerapan praktik berkelanjutan. Nanokomposit, misalnya, yang terbuat dari bahan ramah lingkungan, dapat digunakan dalam biosensor untuk mendeteksi zat seperti melamin32,33,34.
Studi ini menunjukkan bahwa mikroekstraksi fase padat (SPME) digunakan secara efektif karena efisiensi energi dan keberlanjutannya yang lebih tinggi dibandingkan dengan metode ekstraksi tradisional. Ramah lingkungan dan efisiensi energi SPME menjadikannya alternatif yang sangat baik untuk metode ekstraksi tradisional dalam kimia analitik dan menyediakan metode yang lebih berkelanjutan dan efisien untuk persiapan sampel35.
Pada tahun 2013, Wu dkk. mengembangkan biosensor resonansi plasmon permukaan (mini-SPR) yang sangat sensitif dan selektif yang memanfaatkan kopling antara melamin dan antibodi anti-melamin untuk mendeteksi melamin dalam susu formula bayi secara cepat menggunakan immunoassay. Biosensor SPR yang dikombinasikan dengan immunoassay (menggunakan albumin serum sapi yang dikonjugasikan dengan melamin) merupakan teknologi yang mudah digunakan dan berbiaya rendah dengan batas deteksi hanya 0,02 μg mL-136.
Nasiri dan Abbasian menggunakan sensor portabel berpotensi tinggi yang dikombinasikan dengan komposit graphene oksida-kitosan (GOCS) untuk mendeteksi melamin dalam sampel komersial37. Metode ini menunjukkan selektivitas, akurasi, dan respons yang sangat tinggi. Sensor GOCS menunjukkan sensitivitas yang luar biasa (239,1 μM−1), rentang linier 0,01 hingga 200 μM, konstanta afinitas 1,73 × 104, dan LOD hingga 10 nM. Selain itu, sebuah studi yang dilakukan oleh Chandrasekhar dkk. pada tahun 2024 mengadopsi pendekatan ramah lingkungan dan hemat biaya. Mereka menggunakan ekstrak kulit pepaya sebagai agen pereduksi untuk mensintesis nanopartikel seng oksida (ZnO-NPs) dengan metode ramah lingkungan. Selanjutnya, teknik spektroskopi mikro-Raman yang unik dikembangkan untuk penentuan melamin dalam susu formula bayi. ZnO-NPs yang berasal dari limbah pertanian telah menunjukkan potensi sebagai alat diagnostik yang berharga dan teknologi yang andal serta berbiaya rendah untuk memantau dan mendeteksi melamin38.
Alizadeh dkk. (2024) menggunakan platform fluoresensi kerangka logam-organik (MOF) yang sangat sensitif untuk menentukan melamin dalam susu bubuk. Rentang linier dan batas deteksi terendah sensor, yang ditentukan menggunakan 3σ/S, masing-masing adalah 40 hingga 396,45 nM (setara dengan 25 μg kg−1 hingga 0,25 mg kg−1) dan 40 nM (setara dengan 25 μg kg−1). Rentang ini jauh di bawah tingkat residu maksimum (MRL) yang ditetapkan untuk identifikasi melamin dalam susu formula bayi (1 mg kg−1) dan sampel makanan/pakan lainnya (2,5 mg kg−1). Sensor fluoresensi (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) menunjukkan akurasi yang lebih tinggi dan kemampuan pengukuran yang lebih tepat daripada HPLC39 dalam mendeteksi melamin dalam susu bubuk. Biosensor dan nanokomposit dalam kimia hijau tidak hanya meningkatkan kemampuan deteksi tetapi juga meminimalkan bahaya lingkungan sejalan dengan prinsip-prinsip pembangunan berkelanjutan.
Prinsip-prinsip kimia hijau telah diterapkan pada berbagai metode untuk penentuan melamin. Salah satu pendekatannya adalah pengembangan metode mikroekstraksi fase padat dispersif hijau menggunakan polimer polar alami β-siklodekstrin yang dihubungkan silang dengan asam sitrat untuk ekstraksi melamin yang efisien dari sampel seperti susu formula bayi dan air panas. Metode lain menggunakan reaksi Mannich untuk penentuan melamin dalam sampel susu. Metode ini murah, ramah lingkungan, dan sangat akurat dengan rentang linier 0,1–2,5 ppm dan batas deteksi rendah. Selanjutnya, metode yang hemat biaya dan ramah lingkungan untuk penentuan kuantitatif melamin dalam susu cair dan susu formula bayi dikembangkan menggunakan spektroskopi transmisi inframerah transformasi Fourier dengan akurasi tinggi dan batas deteksi masing-masing 1 ppm dan 3,5 ppm. Metode-metode ini menunjukkan penerapan prinsip-prinsip kimia hijau untuk pengembangan metode yang efisien dan berkelanjutan untuk penentuan melamin.
Beberapa penelitian telah mengusulkan metode inovatif untuk deteksi melamin, seperti penggunaan ekstraksi fase padat dan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC)43, serta kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) cepat, yang tidak memerlukan pra-perlakuan kompleks atau reagen pasangan ion, sehingga mengurangi jumlah limbah kimia44. Metode-metode ini tidak hanya memberikan hasil yang akurat untuk penentuan melamin dalam produk susu, tetapi juga sesuai dengan prinsip-prinsip kimia hijau, meminimalkan penggunaan bahan kimia berbahaya dan mengurangi dampak lingkungan secara keseluruhan dari proses analitik.
Empat puluh sampel dari berbagai merek diuji sebanyak tiga kali, dan hasilnya disajikan dalam Tabel 2. Kadar melamin dalam sampel susu formula bayi dan susu bubuk berkisar antara 0,001 hingga 0,004 mg/kg dan antara 0,001 hingga 0,095 mg/kg, masing-masing. Tidak ada perubahan signifikan yang diamati antara tiga kelompok usia susu formula bayi. Selain itu, melamin terdeteksi pada 80% susu bubuk, tetapi 65% susu formula bayi terkontaminasi melamin.
Kandungan melamin dalam susu bubuk industri lebih tinggi daripada dalam susu formula bayi, dan perbedaannya signifikan (p<0,05) (Gambar 2).
Hasil yang diperoleh berada di bawah batas yang ditetapkan oleh FDA (di bawah 1 dan 2,5 mg/kg). Selain itu, hasil tersebut sesuai dengan batas yang ditetapkan oleh CAC (2010) dan EU45,46, yaitu batas maksimum yang diizinkan adalah 1 mg kg-1 untuk susu formula bayi dan 2,5 mg kg-1 untuk produk susu.
Menurut studi tahun 2023 oleh Ghanati dkk.47, kandungan melamin dalam berbagai jenis susu kemasan di Iran berkisar antara 50,7 hingga 790 μg kg−1. Hasil mereka berada di bawah batas yang diizinkan FDA. Hasil kami lebih rendah daripada hasil Shoder dkk.48 dan Rima dkk.49. Shoder dkk. (2010) menemukan bahwa kadar melamin dalam susu bubuk (n=49) yang ditentukan dengan ELISA berkisar antara 0,5 hingga 5,5 mg/kg. Rima dkk. menganalisis residu melamin dalam susu bubuk dengan spektrofotometri fluoresensi dan menemukan bahwa kandungan melamin dalam susu bubuk adalah 0,72–5,76 mg/kg. Sebuah studi dilakukan di Kanada pada tahun 2011 untuk memantau kadar melamin dalam susu formula bayi (n=94) menggunakan kromatografi cair (LC/MS). Konsentrasi melamin ditemukan berada di bawah batas yang dapat diterima (standar pendahuluan: 0,5 mg kg−1). Kemungkinan kecil bahwa kadar melamin yang dipalsukan yang terdeteksi merupakan taktik yang digunakan untuk meningkatkan kandungan protein. Namun, hal itu tidak dapat dijelaskan oleh penggunaan pupuk, pemindahan isi kontainer, atau faktor serupa. Selain itu, sumber melamin dalam susu bubuk yang diimpor ke Kanada tidak diungkapkan50.
Hassani dkk. mengukur kandungan melamin dalam susu bubuk dan susu cair di pasar Iran pada tahun 2013 dan menemukan hasil yang serupa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kecuali satu merek susu bubuk dan susu cair, semua sampel lainnya terkontaminasi melamin, dengan kadar berkisar antara 1,50 hingga 30,32 μg g−1 dalam susu bubuk dan 0,11 hingga 1,48 μg ml−1 dalam susu. Perlu dicatat, asam sianurat tidak terdeteksi dalam sampel mana pun, sehingga mengurangi kemungkinan keracunan melamin bagi konsumen. 51 Studi sebelumnya telah menilai konsentrasi melamin dalam produk cokelat yang mengandung susu bubuk. Sekitar 94% sampel impor dan 77% sampel Iran mengandung melamin. Kadar melamin dalam sampel impor berkisar antara 0,032 hingga 2,692 mg/kg, sedangkan dalam sampel Iran berkisar antara 0,013 hingga 2,600 mg/kg. Secara keseluruhan, melamin terdeteksi pada 85% sampel, tetapi hanya satu merek tertentu yang memiliki kadar di atas batas yang diizinkan.44 Tittlemier dkk. melaporkan kadar melamin dalam susu bubuk berkisar antara 0,00528 hingga 0,0122 mg/kg.
Tabel 3 merangkum hasil penilaian risiko untuk ketiga kelompok umur. Risiko kurang dari 1 di semua kelompok umur. Dengan demikian, tidak ada risiko kesehatan non-karsinogenik dari melamin dalam susu formula bayi.
Tingkat kontaminasi yang lebih rendah pada produk susu mungkin disebabkan oleh kontaminasi yang tidak disengaja selama persiapan, sedangkan tingkat yang lebih tinggi mungkin disebabkan oleh penambahan yang disengaja. Selain itu, risiko keseluruhan terhadap kesehatan manusia dari mengonsumsi produk susu dengan kadar melamin rendah dianggap rendah. Dapat disimpulkan bahwa mengonsumsi produk yang mengandung kadar melamin serendah itu tidak menimbulkan risiko apa pun terhadap kesehatan konsumen52.
Mengingat pentingnya manajemen keamanan pangan dalam industri susu, terutama dalam hal melindungi kesehatan masyarakat, sangat penting untuk mengembangkan dan memvalidasi metode untuk menilai dan membandingkan kadar dan residu melamin dalam susu bubuk dan susu formula bayi. Metode spektrofotometri HPLC-UV yang sederhana dan akurat telah dikembangkan untuk penentuan melamin dalam susu formula bayi dan susu bubuk. Metode ini divalidasi untuk memastikan keandalan dan akurasinya. Batas deteksi dan kuantifikasi metode ini terbukti cukup sensitif untuk mengukur kadar melamin dalam susu formula bayi dan susu bubuk. Menurut data kami, melamin terdeteksi di sebagian besar sampel Iran. Semua kadar melamin yang terdeteksi berada di bawah batas maksimum yang diizinkan yang ditetapkan oleh CAC, menunjukkan bahwa konsumsi produk susu jenis ini tidak menimbulkan risiko bagi kesehatan manusia.
Semua reagen kimia yang digunakan adalah kelas analitik: melamin (2,4,6-triamino-1,3,5-triazin) dengan kemurnian 99% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); asetonitril kelas HPLC (Merck, Darmstadt, Jerman); air ultra murni (Millipore, Morfheim, Prancis). Filter jarum suntik sekali pakai (Chromafil Xtra PVDF-45/25, ukuran pori 0,45 μm, diameter membran 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Jerman).
Bak ultrasonik (Elma, Jerman), sentrifugasi (Beckman Coulter, Krefeld, Jerman) dan HPLC (KNAUER, Jerman) digunakan untuk menyiapkan sampel.
Kromatograf cair kinerja tinggi (HPLC) (KNAUER, Jerman) yang dilengkapi dengan detektor UV digunakan. Kondisi analisis HPLC adalah sebagai berikut: sistem UHPLC Ultimate yang dilengkapi dengan kolom analitik ODS-3 C18 (4,6 mm × 250 mm, ukuran partikel 5 μm) (MZ, Jerman) digunakan. Eluen HPLC (fase gerak) adalah campuran TFA/metanol (450:50 mL) dengan laju alir 1 mL min-1. Panjang gelombang deteksi adalah 242 nm. Volume injeksi adalah 100 μL, suhu kolom adalah 20 °C. Karena waktu retensi obat cukup lama (15 menit), injeksi berikutnya harus dilakukan setelah 25 menit. Melamin diidentifikasi dengan membandingkan waktu retensi dan puncak spektrum UV dari standar melamin.
Larutan standar melamin (10 μg/mL) disiapkan menggunakan air dan disimpan dalam lemari pendingin (4 °C) terhindar dari cahaya. Encerkan larutan stok dengan fase gerak dan siapkan larutan standar kerja. Setiap larutan standar diinjeksikan ke dalam HPLC sebanyak 7 kali. Persamaan kalibrasi 10 dihitung dengan analisis regresi dari luas puncak yang ditentukan dan konsentrasi yang ditentukan.
Bubuk susu sapi yang tersedia secara komersial (20 sampel) dan sampel berbagai merek susu formula bayi berbahan dasar susu sapi (20 sampel) dibeli dari supermarket dan apotek lokal di Iran untuk memberi makan bayi dari berbagai kelompok usia (0–6 bulan, 6–12 bulan, dan >12 bulan) dan disimpan pada suhu dingin (4 °C) hingga analisis. Kemudian, 1 ± 0,01 g bubuk susu yang telah dihomogenkan ditimbang dan dicampur dengan asetonitril:air (50:50, v/v; 5 mL). Campuran diaduk selama 1 menit, kemudian disonikasi dalam bak ultrasonik selama 30 menit, dan akhirnya dikocok selama 1 menit. Campuran kemudian disentrifugasi pada 9000 × g selama 10 menit pada suhu kamar dan supernatan disaring ke dalam vial autosampler 2 ml menggunakan filter jarum suntik 0,45 μm. Filtrat (250 μl) kemudian dicampur dengan air (750 μl) dan diinjeksikan ke dalam sistem HPLC10,42.
Untuk memvalidasi metode ini, kami menentukan perolehan kembali (recovery), akurasi, batas deteksi (LOD), batas kuantifikasi (LOQ), dan presisi dalam kondisi optimal. LOD didefinisikan sebagai kandungan sampel dengan tinggi puncak tiga kali lipat dari tingkat kebisingan dasar. Di sisi lain, kandungan sampel dengan tinggi puncak 10 kali lipat dari rasio sinyal terhadap kebisingan didefinisikan sebagai LOQ.
Respons perangkat ditentukan menggunakan kurva kalibrasi yang terdiri dari tujuh titik data. Kandungan melamin yang berbeda digunakan (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 dan 1,2). Linearitas prosedur perhitungan melamin ditentukan. Selain itu, beberapa tingkat melamin yang berbeda ditambahkan ke sampel kosong. Kurva kalibrasi dibuat dengan menyuntikkan secara kontinu 0,1–1,2 μg mL−1 larutan melamin standar ke dalam sampel susu formula bayi dan susu bubuk, dan R2-nya = 0,9925. Akurasi dinilai dengan pengulangan dan reproduksibilitas prosedur dan dicapai dengan menyuntikkan sampel pada hari pertama dan tiga hari berikutnya (dalam rangkap tiga). Pengulangan metode dinilai dengan menghitung RSD % untuk tiga konsentrasi melamin yang ditambahkan berbeda. Studi pemulihan dilakukan untuk menentukan presisi. Tingkat pemulihan dengan metode ekstraksi dihitung pada tiga tingkat konsentrasi melamin (0,1, 1,2, 2) dalam sampel susu formula bayi dan susu bubuk9,11,15.
Perkiraan asupan harian (EDI) ditentukan menggunakan rumus berikut: EDI = Ci × Cc/BW.
Di mana Ci adalah kandungan melamin rata-rata, Cc adalah konsumsi susu dan BW adalah berat rata-rata anak.
Analisis data dilakukan menggunakan SPSS 24. Normalitas diuji menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov; semua data merupakan uji nonparametrik (p = 0). Oleh karena itu, uji Kruskal-Wallis dan uji Mann-Whitney digunakan untuk menentukan perbedaan signifikan antar kelompok.
Ingelfinger, Jr. Melamin dan dampaknya terhadap kontaminasi makanan global. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, dkk. Pengaruh pH terhadap migrasi melamin dalam mangkuk anak-anak. Jurnal Internasional Kontaminasi Pangan, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP dan Gilbert, IH. Menargetkan senyawa beracun ke bagian dalam trypanosoma. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, dkk. Evaluasi in vitro dan in vivo dendrimer melamin sebagai kendaraan pengiriman obat. Jurnal Farmasi Internasional, 281(1–2), 129–132(2004).
Organisasi Kesehatan Dunia. Pertemuan Pakar 1–4 untuk meninjau aspek toksikologi melamin dan asam sianurat (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH dan Lee, PK-T. Toksisitas melamin dan ginjal. Jurnal Masyarakat Nefrologi Amerika 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. dan Demir, N. Pengembangan adsorben IMAC baru untuk identifikasi melamin dalam produk susu dengan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). Jurnal Sintesis dan Analisis Pangan 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. dan Imim, A. Penentuan spektrofotometri sederhana melamin dalam susu cair berdasarkan reaksi Mannich hijau. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. dan El-Habib, R. Penentuan melamin dalam susu formula bayi, susu bubuk, dan sampel ikan pangasius dengan kromatografi HPLC/susunan dioda. Jurnal Toksikologi Analitik Lingkungan, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD, dan Osterloh, JD Toksisitas melamin. Jurnal Toksikologi Medis, 6, 50–55 (2010).
Organisasi Kesehatan Dunia (WHO), Toksikologi dan aspek kesehatan melamin dan asam sianurat: Laporan pertemuan ahli kolaboratif WHO/FAO yang didukung oleh Health Canada, Ottawa, Kanada, 1-4 Desember 2008 (2009).
Korma, SA, dkk. Studi perbandingan komposisi lipid dan kualitas susu formula bayi bubuk yang mengandung lipid struktural fungsional baru dan susu formula bayi komersial. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. dan Hashem, H. Peningkatan nilai gizi, atribut kualitas dan umur simpan susu formula bayi menggunakan minyak sawit. Jurnal Penelitian Pertanian Timur Tengah 6, 274–281 (2017).
Yin, W., dkk. Produksi antibodi monoklonal terhadap melamin dan pengembangan metode ELISA kompetitif tidak langsung untuk deteksi melamin dalam susu mentah, susu bubuk, dan pakan ternak. Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan 58(14), 8152–8157 (2010).